O método de centrifugação de isodensidade é também chamado de centrifugação de zona.

do método.VantagensÉ possível separar vários ou todos os componentes da amostra ao mesmo tempo, com boa resolução, bom efeito de separação, pode obter um componente mais puro de uma vez.

DesvantagensÉ o tempo de centrifugação mais longo, a necessidade de preparar o líquido gradiente, os requisitos de operação são elevados.

De acordo com o princípio de separação centrífuga, a centrífuga de gradiente de densidade pode ser dividida emMetodo de centrifugação com zona de velocidade(Método de centrifugação zonal, R-Z) 和Centrífuga de densidade igual (Método de centrifugação isopícnica).

A centrifugação de banda de zona de velocidade também pode ser chamada de centrifugação de densidade de zona isométrica, é a purificação por separação centrífuga de amostras misturadas de acordo com os diferentes tamanhos de volume e diferentes fatores de sedimentação das partículas componentes da amostra.

A solução de amostra que precisa ser separada é colocada sobre uma coluna de gradiente formada por materiais de gradiente de densidade, como sacarose, cloreto de césio (CsCI), etc., e a densidade das partículas da amostra deve ser maior que a densidade de qualquer ponto da coluna de gradiente, caso contrário, o efeito de centrifugação de zona ideal não pode ser obtido. Durante a centrifugação, os diferentes componentes da amostra misturada formarão suas respectivas faixas de zona em diferentes locais da coluna de líquido gradiente, escolhendo a velocidade e o tempo apropriados para a centrifugação, quando as faixas de zona de cada componente são puxadas para longe, termine a centrifugação e, em seguida, retire a faixa de zona.Desta forma, os componentes da amostra misturada podem ser purificados por meio de uma única centrifugação, e sua pureza e taxa de recuperação podem satisfazer os requisitos.

VantagensÉ uma purificação de separação, a diferença do fator de sedimentação do componente de mais de 20% pode ser escolhida com este método, alta resolução, operação hábil pode separar bem a amostra do fator de sedimentação do componente de 5% ~ 10%.

DesvantagensÉ a limitação das condições do material, a concentração do líquido da amostra não pode ser muito alta, caso contrário, as condições de operação são difíceis de controlar, ao mesmo tempo que este método é muito menor em comparação com o método de centrifugação diferencial.

Figura 1 Zona de velocidade com centrifugação

O tempo da zona de velocidade com centrifugação deve ser estritamente controlado, não pode ser muito curto, caso contrário, a área da amostra não é clara, o tempo não pode ser muito longo, caso contrário, os componentes à separação podem afundar. A velocidade de sedimentação das partículas de amostra que precisam ser separadas depende de fatores como a forma, tamanho, densidade e força centrífuga das partículas. O estado da amostra antes e depois da centrifugação é mostrado na Figura 1.

A aplicação clássica da centrifugação com zona de velocidade é a purificação de vários subcelulares (ribosomas, mitocondrias, exossomas, etc.) e partículas virales (veículos virales, vacinas, etc.) através da centrifugação por gradiente de densidade de sacarose. Por exemplo, a precipitação de ribosoma 70S obtida na fase anterior, após hidrolise, pode ser usada por centrifugação em gradiente de densidade de sacarose para purificação adicional para obter duas subunidades de 50S e 30S. O processo experimental específico é o seguinte:

As aulas de centrifugação estão sendo carregadas em massa, mantenha atenção para saber mais sobre métodos de centrifugação!

Foco nas aulas de centrifugação anteriores

□Termos comuns de centrifugação – força centrífuga e força relativa

□Coeficiente de sedimentação em termos comuns

□Método de centrifugação rápida para preparar soro sem exossomas

□Eficiência da cabeça do fator K e tempo de centrifugação

□Centrífuga diferencial | Seu método de purificação de separação foi escolhido corretamente?

□Problemas de esterilização do laboratório, 50% para resolver!

* Número de aprovação: RA-051-cent-adv-ruo

* Data de revisão: 16/10/2020

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