Durante o experimento, devido às várias diferenças nas propriedades da amostra, o resultado de purificação de separação desejado só foi obtido se o método de centrifugação correto foi escolhido. Os métodos comuns de centrifugação são principalmente a centrifugação diferencial e a centrifugação de gradiente de densidade. O método de centrifugação por gradiente de densidade pode ser dividido em centrifugação com zona de velocidade e centrifugação por gradiente de densidade equivalente. Esta edição apresenta especificamente a centrifugação diferencial do método de centrifugação.

Metodo de centrifugação diferencial

O método de centrifugação a velocidade diferencial é também chamado de separação diferencial de força centrífuga.

Princípio da Centrífuga Diferencial

Usando a diferença do coeficiente de sedimentação de cada componente na amostra, aplicar diferentes forças de centrifugação a diferentes partículas, após várias centrifugações, a velocidade de centrifugação aumenta gradualmente e as partículas diferentes se depositam em seguida, alcançando assim a separação centrífuga.

O princípio da centrifugação diferencial pode ser descrito pela expressão de força centrífuga: F = ma, onde a = ω2R.

Devido à pequena massa das partículas de tamanho pequeno, a força centrífuga necessária para a separação é grande. Para satisfazer as necessidades de grande força centrífuga, é necessário aumentar sua velocidade de rotação para que possa ser separado. A separação de partículas de diferentes tamanhos com diferentes forças centrífugas é um método de separação dinâmica, especialmente partículas com maior diferença de velocidade de sedimentação.

Se houver três partículas grandes e pequenas de tamanho diferente na amostra separada, aplicar uma força centrífuga diferente a elas, as partículas de tamanho grande, com maior massa, se depositarão primeiro; Separar o líquido superior para uma segunda centrifugação do líquido superior com maior velocidade de rotação, e as partículas são separadas; Em seguida, levantar a limpeza com maior força centrífuga, maior velocidade de rotação e depois precipitar as partículas pequenas para alcançar a separação das partículas diferentes, como mostrado na Figura 1.

Figura 1 Centrífuga diferencial

Como o sedimento de cada partícula contém partículas secundárias parciais, se você quiser purificar uma determinada partícula, o sedimento da partícula precisa ser diluído e depois sedimentado por centrifugação, para obter a partícula de pureza ideal.

Vantagens e desvantagens do método de centrifugação diferencial

A centrífuga diferencial é usada principalmente para separar partículas com grandes diferenças de diâmetro e densidade, e sua vantagem é o curto tempo de separação, a alta repetibilidade e o grande volume de processamento de amostras, que podem ser usados ​​para a separação inicial de grandes quantidades de amostras.

No entanto, ao usar a centrifugação diferencial para separar amostras complexas ou quando os requisitos de pureza de separação são elevados, a centrifugação será necessária várias vezes e a operação será complicada; Em segundo lugar, devido à limpeza, dissolução e re-precipitação múltiplas do precipitado, é fácil causar perdas intermediárias, causando problemas de má resolução centrífuga; Além disso, devido à convexão, à difusão e à poluição durante a precipitação de carga durante a separação real, a purificação da separação * não pode ser realizada para alguns componentes com coeficientes de precipitação pouco diferentes. Devido às limitações da centrifugação diferencial em termos de pureza e taxa de recuperação de amostras, ela é usada principalmente para purificação de separação inicial de grandes quantidades de amostras para preparar a próxima etapa de teste ou experimento.

Por exemplo, podemos fazer várias coletas passo a passo de centrifugação e precipitação / limpeza superior de diferentes forças relativas e tempos de centrifugação de molho homogêneo de tecido hepático animal para obter a separação inicial de núcleos celulares, mitocondrias, lisosomas e ribosomas de amostras para outros testes ou experiências de purificação fina para a próxima etapa. Os processos específicos de processamento são os seguintes:

As aulas de centrifugação estão sendo carregadas em massa, mantenha atenção para saber mais sobre métodos de centrifugação!