A célula umbilical HUVEC é uma célula-tronco derivada do tecido do cordão umbilical. É uma das células importantes da veia umbilical e, em teoria, pode passar indefinidamente. Portanto, as células endoteliais da veia umbilical humana (HUVEC) são frequentemente usadas em experimentos de células endoteliais vasculares, em vez de células endoteliais venosas ou endoteliais arteriais. As células endoteliais da veia umbilical são facilmente acessíveis ​​e de fontes abundantes, portanto, as células endoteliais da veia umbilical são frequentemente usadas ​​em estudos endoteliais vasculares. Então, você realmente conhece seus passos experimentais de cultivo?

Armazenar cordão umbilical recém-nascido de 15 a 20 cm em solução PBS estéril. (Nota: Deve ser conservado por 24 horas a 4 ° C e não mais de 6 horas a temperatura ambiente, caso contrário será descartado.)

Inserir uma agulha no tubo da veia umbilical e lavar com uma solução PBS estéril 3-5 vezes até que o sangue sujo seja limpo.

3, pegue a extremidade inferior do cordão umbilical com uma pinça cirúrgica, adicione 15 ml de colágenase (1 mg / ml) e digera a temperatura ambiente por 15-20 minutos, agitando o cordão umbilical de vez em quando.

Após a digestão, solte a pinça cirúrgica inferior, derrame o líquido digestivo em um tubo centrífugo estéril de 50 ml e enxague o cordão umbilical 2-3 vezes com uma solução PBS estéril.

Liquido coletado por centrifugação (2000 rpm) por 3 minutos.

Remova o líquido superior, adicione 10ml de meio M199 (adicione 10u / mlbFGF), soprar as células com o cotovelo, transferir todo o líquido para uma garrafa com gelatina e cultivo a 37 ° C. (Nota: Adicione 3-4 ml de solução estéril de gelatina a 1% em cada garrafa de cultura, agite completamente para que a solução de gelatina * cobra o fundo da garrafa e incube a 37 ° C por pelo menos 2 horas.) Coloque a solução de gelatina antes de usar. O revestimento de gelatina ajuda a adesão celular. ）

Após 24 horas de cultura de células da veia umbilical HUVEC, derrame o meio de cultura e lave 2-3 vezes com solução PBS estéril. Lave os glóbulos vermelhos e mortos e adicione 10 ml de meio fresco M199.

O meio deve ser substituído a cada dois dias (2/3 do meio deve ser substituído cada vez).

Após 5-7 dias de cultura, as células podem crescer até uma camada única de 80-90% e, em seguida, podem ser transmitidas.

10, derramar o meio de cultura, lavar 2-3 vezes com solução PBS estéril, adicionar 2-3ml de líquido digestivo (0,25% * + 0,1% EDTA) células digestivas. observação sob o microscópio. Uma vez que as células são redondeadas, adicione um meio DMEM contendo soro 2-3 vezes para terminar a reação.

Sopre as células-tronco com o codo e, em seguida, transfira as células digeridas a uma velocidade de 2.000 rpm em um tubo centrífugo estéril de 50 ml por 3 minutos.

12, derrame o líquido líquido e adicione 10ml de meio fresco. Normalmente, 3-4 garrafas de células podem ser transmitidas em uma garrafa e, em seguida, cultivadas de acordo com a transmissão.

As células da veia umbilical HUVEC geralmente são transmitidas de 2 a 3 gerações (cerca de 20 dias) para vários experimentos.