Problemas comuns com cromatografia líquida de alta eficiência são:
1 - Difusão de turbulenças
A fase de fluxo toca partículas sólidas maiores, gerando um vortex da mesma forma que a água fluente toca uma pedra. Se o cilindro é preenchido de forma não uniforme, algumas partes são soltas ou têm fossas finas, então a velocidade da fase de fluxo é rápida; Alguns blocos de partes ou alinhamento apertado, o fluxo é lento, muitas vias de fluxo são rápidas e lentas, tornando a banda de área mais larga. Portanto, as partículas do veículo de fase sólida devem ser pequenas e uniformes, e a coluna deve ser uniforme e apertada, de modo que a difusão do turbilhão seja pequena e a eficiência da coluna seja alta.
2 - Difusão molecular
A difusão molecular é o movimento de moléculas de matéria de regiões de alta concentração para regiões de baixa concentração, também conhecida como difusão molecular longitudinal. Para reduzir a difusão molecular, é necessário usar colunas pequenas e uniformes de partículas de fase sólida. Ao mesmo tempo, durante a operação, se a velocidade de fluxo é muito lenta e a substância separada permanece por um longo tempo, a difusão é grave.
3 – Transferência de qualidade
A matéria separada deve ser equilibrada entre a fase de fluxo e a fase fixa, de modo a formar uma faixa mais estreita. Na cromatografia de fase líquida, as moléculas solídas são distribuídas entre as duas fases líquidas ou são adsorvidas e desorbidas na fase sólida. Quando a velocidade de fluxo é rápida, a velocidade de transferência é lenta, não chegando à fase de equilíbrio é movida para a frente, o movimento desequilibrado dessas substâncias torna a banda de área mais larga.
4. Velocidade de fluxo
Quando a velocidade de fluxo é muito baixa, a difusão molecular é grave, especialmente em cromatografia de gás. Como a altura da torre teórica para mapear a velocidade de fluxo, a altura da torre teórica diminui rapidamente com o aumento da velocidade de fluxo, quando o valor baixo é alcançado, a velocidade de fluxo aumenta, a transferência de massa desempenha o papel principal, a altura da torre teórica aumenta. Na cromatografia líquida de alta eficiência, a velocidade de fluxo é ligeiramente menor, mas na cromatografia de filtragem de gel, porque a substância deve penetrar no interior do gel, a transferência de massa tem um grande impacto, e a velocidade de fluxo reduz a eficiência da coluna.
Tamanho de partícula de fase fixa
Quanto maior a eficiência da coluna menor da partícula de fase fixa, maior a resistência ao fluxo da fase de fluxo e maior a pressão necessária para fazê-la fluir.