Preparar anticorpos fluorescentes ou marcadores genéticos que identifiquem a atividade hormonal e de receptores de neurotransmissores não é apenas difícil, mas também demorado. Este artigo descreve uma alternativa útil que pode ser usada para registrar mudanças na resposta fisiológica resultante da ligação de um excitante a seus receptores homólogos, muitos dos quais são receptores ligados à proteína G. Quando o excitante se liga a um receptor ligado à proteína G, ele desencadeia uma série de rápidos riscos que geralmente resultam na liberação instantânea de íons de cálcio no armazenamento celular. Alterações instantâneas nas concentrações intracelulares de íons de cálcio ([Ca2 + i]) foram usadas anteriormente em citologia de fluxo para identificar a expressão de receptores funcionais em subpopulações celulares [2], onde descobrimos que o sistema de transmissão de amostras periféricas do novo analisador CytoFLEX é especialmente adequado para estudos de íons de cálcio baseados em excitantes. Usando o indicador de cálcio fluorescente verde baseado em ésteres, Fluo-4 AM (LifeTechnologies), as alterações [Ca2+i] que ocorrem nas células HEK-293 na resposta à estimulação do ATP podem ser medidas. Melhoria simples do tubo do analisador CytoFLEX para facilitar o acesso ao tubo de amostra para a aplicação de agitantes; Para melhorias adicionais, é possível implementar o método de detecção de "tempo de parada". Através da reaplicação do agonista como critério de julgamento fisiológico para nossos ensaios, conseguimos essencialmente identificar o receptor e provar conclusivamente sua funcionalidade. Escrito por Ira Schieren1 Peter Racanelli2 Damian Williams3
Unidades pertencentes: 1. Instituto de Pesquisa Médica Howard Hughes, Centro Médico da Universidade de Columbia 2. Beckman Coulter Inc., Miami, Estados Unidos 3. Departamento de Patologia e Biologia Celular, Centro Médico da Universidade de Columbia)